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一文與您分享通用PCR試劑盒的樣品制備方法
點擊次數(shù):587 更新時間:2022-06-17
  通用PCR試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,含有TaqDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR反應(yīng),具有廣泛的用途。
 
  今天小編要與大家分享的是通用PCR試劑盒的樣品制備方法:
 
  1.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。。也可以選購本公司的一管式病毒DNAout或其升級版柱式病毒DNAout。本試劑盒免費贈送15次DNA病毒裂解液試用裝。稀釋陽性對照(以10E2-10E7這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為86bp的DNA的片段作為陽性對照。
 
  2.標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
 
  3.用帶芯槍頭分別加入45μL模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
 
  4.在7號管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
 
  5.換槍頭,在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
 
  6.換槍頭,在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
 
  7.換槍頭,在4號管中加5μL1×10E5拷貝/μL的陽性對照到4號管中,得1×10E4拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
 
  8.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
 
  9.在PCR管中加入下列成分。(待測樣品需要做三次重復(fù),下表只列出一次。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加。)
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