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酶聯免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA）是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術，是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法。封閉（blocking）是繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據的空隙，封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥在ELISA試劑盒其后的步驟中干擾物質的再吸附。在免疫學實驗中，通常使用封閉劑來減少非特異性結合。常用的封閉劑有脫脂奶粉，BSA，血清以及 Fab 片段單鏈二抗等。根據不同的平臺選擇相應的封閉劑。
1、脫脂奶粉
作用原理：脫脂奶粉含有多種蛋白，可以封閉未吸附蛋白的固相載體（WB 膜、ELISA 板等）位點，減少抗體與之結合的概率，避免非特異性結合帶來的高背景。
優(yōu)點：價格便宜，因含多種不同分子量的蛋白，故封閉起來更全面。
缺點：成分復雜，適用范圍窄。不適用于生物素和堿性磷酸酶標記的抗體系統。且封閉后的載體不易長期保存，因此在試劑盒的生產中較少應用。
2、牛血清白蛋白BSA
作用原理：同脫脂奶粉，封閉未吸附蛋白的固相載體位點。
優(yōu)點：成分單一，適用于 ELISA 實驗，生物素、堿性磷酸酶系統的免疫學檢測實驗或者其他對特異性要求較高的實驗。
缺點：大部分 BSA 中有少量的抗體殘留，會導致抗原/抗體之間的交叉反應，造成一定背景。
3、動物血清
作用原理：
1、待檢樣本會有些與蛋白非特異性結合的物質，從而導致背景過高，因此可以用血清封閉掉這部分非特異性的結合，從這點看，血清和 BSA 沒有明顯區(qū)別；
2、待檢樣本中可能會有 Fc 受體，可以和抗體恒定區(qū)結合，而封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本 Fc 受體之間結合。BSA 則無法封閉 Fc 受體。
優(yōu)點：因為血清可以封閉 Fc 受體及減少抗體間的非特異性結合，故在免疫組化、免疫熒光實驗中有廣泛應用。
缺點：某些封閉血清中可能含有疊氮鈉，因此不適用于 HRP 酶標的檢測體系。
4、Fab 片段單鏈二抗
作用原理：由于二價的抗體（全 IgG 或 F（ab’）2 片段）有兩個結合位點，不能用來封閉。而 Fab 片段單鏈二抗只有一個結合位點，因此可全封閉免疫球蛋白。
應用：在 IHC 或 IF 雙標/多標實驗中，封閉樣本表面的免疫球蛋白，封閉組織切片或細胞表面的內源性免疫球蛋白，并可解決兩個一抗來自同一種屬的麻煩。
5、無蛋白封閉劑---新型高效封閉劑
Blocker 無蛋白封閉劑，該封閉劑是通過化學合成高親水性化合物，不存在生物封閉劑所擔心的生物安全性、質量、批間差等問題。
主要特點：
1）與微球表面活化的羧基偶聯形成穩(wěn)定的共價鍵
2）純化學合成，批間差小，純度高
3）空間結構簡單，更充分的封閉微球表面，降低微球非特異性吸附，減少基質干擾
4）提高試劑靈敏度
5）含大量親水基團，有利于提高試劑穩(wěn)定性
應用領域：乳膠免疫比濁試劑/ 化學發(fā)光試劑 ，代替 BSA 作為封閉劑或與 BSA 聯合封閉。
6、免疫試劑穩(wěn)定液
免疫試劑穩(wěn)定液主要用于免疫分析檢測試劑/抗原/抗體/蛋白的保存. 該產品屬于即用型，無需稀釋，使用簡單方便，將待保存物質溶于穩(wěn)定液中后置于冰箱即可。免疫試劑穩(wěn)定 液有利于維持蛋白的三維結構，保持蛋白的生物活性，可延長免疫分析試劑及蛋白的使用期限，確保產品的性能。
應用領域:
1）免疫分析試劑保存, 如免疫比濁檢測試劑/化學發(fā)光檢測試劑
2）蛋白質保存，如抗原/抗體/酶類等
